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cck8试剂正确的操作方案
发布时间:2018-04-23 点击次数:811次
对于cck8试剂的使用想必不少用户还不知道如何正确的进行操作,今天小编就告诉大家如何正确的操作cck8试剂吧
cck8试剂的操作说明
cck8试剂细胞活性检测
1. 在96 孔板中接种细胞悬液 (100 ml /孔 ) 。将培养板放在培养箱预培养 (在37 ℃,5% CO2的条件下 )向每孔加入10 ml 的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 O.D值的读数) 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。 4. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度 如果暂时不测定O.D值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。
细胞增殖 -毒性检测
1. 在96 孔板中配制 100 ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24小时 ( 在37℃, 5% CO2的条件下 )向培养板加入10 ml不同浓度的待测物质将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或48小时 )向每孔加入10 ml cck8试剂 溶液 (注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 O.D值的读数) 。 5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。 6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。如果暂时不测定O.D值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。 注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加 cck8试剂之前更换新鲜培养基,去掉药物的影响。当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
cck8试剂制作标准曲线
1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。 2. 按比例 ( 例如:1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做 3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。
3. 接种后培养2-4 小时使细胞贴壁,然后加 cck8试剂试剂培养一定时间后测定 O.D值,制作出一条以细胞数量为横坐标 (X轴) ,O.D值为纵坐标 (Y轴) 的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量 (使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入 cck8试剂后的培养时间)。
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